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CRISPR-Cas9
原理：通過向導RNA（gRNA）引導Cas9核酸酶靶向切割特定DNA序列，利用細胞修復機制（NHEJ或HDR）引入突變。
優勢：高效、成本低、設計靈活，可同時編輯多個基因。
應用：敲除（KO）、敲入（KI）、點突變等。
傳統方法（ES細胞打靶）
原理：通過同源重組在胚胎干細胞（ES細胞）中修飾目標基因，再通過顯微注射獲得嵌合體小鼠。
優勢：精準度高，適合復雜修飾（如條件性敲除）。
缺點：周期長（6-12個月）、成本高。
其他技術
堿基編輯（Base Editing）：無需DNA雙鏈斷裂，直接轉換單個堿基（如C→T或A→G）。
Prime Editing：更精準的編輯，可實現小片段插入/缺失或點突變。
設計gRNA和Cas9
選擇靶序列（避免脫靶效應），合成gRNA和Cas9 mRNA/protein。
遞送系統
受精卵注射：將CRISPR組件直接注射到小鼠受精卵中（原核期）。
體外電轉：對ES細胞或囊胚進行編輯后移植。
胚胎移植
將編輯后的胚胎移植到假孕母鼠子宮內，獲得F0代小鼠。
基因型鑒定
PCR、測序或Southern blot驗證編輯效果。
表型分析
根據研究目的分析生理、行為或分子水平的變化。
疾病模型
模擬人類遺傳?。ㄈ绨┌Y、阿爾茨海默病）。
基因功能研究
通過敲除/過表達探索基因作用機制。
藥物測試
評估藥物在特定基因背景下的療效和毒性。
脫靶效應
使用預測軟件（如CRISPR Design）優化gRNA設計，并通過全基因組測序驗證。
嵌合體問題
F0代小鼠可能為嵌合體，需通過繁育獲得穩定遺傳的品系。
倫理審批
實驗需符合動物倫理規范（如IACUC審核）。
數據庫：
ENSEMBL（小鼠基因信息）、CRISPR Design工具（如Benchling）。
商業服務：
多家公司提供定制化基因編輯小鼠（如Cyagen、Jackson Laboratory）。
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